افزایش تولید اسیدآمینه l. lysine از طریق موتاسیون و انتخاب در brevibacterium linens ptcc 1603
پایان نامه
- وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید بهشتی - دانشکده علوم
- نویسنده علی اصغر دلدار
- استاد راهنما یوسف سیدنا مهرداد آذین
- تعداد صفحات: ۱۵ صفحه ی اول
- سال انتشار 0
چکیده
اسید آمینه ال - لیزین یکی از اسیدهای آمینه ضروری برای دام و طیور می باشد، لذا در تغذیه آنها به عنوان یک مکمل غذایی از اهمیت ویژه ای برخوردار است . امروزه متداولترین منایع تولید لیزین، میکروارگانیسمها و خصوصا باکتریهای دو گونه بروی باکتریوم و کورینه باکتریوم می باشند. به منظور افزایش تولید این اسید آمینه در باکتریهای فوق، از ایجاد جهش و گرینش در سویه های مناسب استفاده می شود. سویه هایی که بدین ترتیب جدا می شوند از قدرت تولید بالایی برخوردار هستند. در پروژه حاضر از brevibactrium linens ptcc 1603 برای تولید ال - لیزین استفاده شد. بدین منظور این باکتری در معرض uv و (n - methyl - n - nitrosoguanidine) ntg قرار داده شد تا پس از جهش زایی موتانتهای موردنظر جدا شوند. برای دستیابی به این موتانت (ها) چندین مرحله اصلی شدند: 1 - مقدار ال - لیزین تولید شده توسط سویه والد محاسبه شد (56/5 mg/l) 2 - منحنی مرگ این سویه در مقابل پرتوهای uv رسم شد و زمان و فاصله مناسب (اپتیمم) برای دستیابی به 1 درصد، بقای سلولی محاسبه گردید. بدین منظور 0.1 ml سوسپانسیون باکتری (2/3×104 cell/ml) بر سطح محیط مغذی پخش گردید و سپس تحت شرایط انتخابی تابش داده شد. نتیجه این مرحله از مطالعه تعیین فاصله 35cm از منبع تابش (لامپ 15 w پرتوهای فرابنقش) و زمان 30s به عنوان شرایط اپتیمم تابش دهی بود. 3 - پس از جهش زایی با uv، یک موتانت با 151mg/l تولید لیزین، از بین 25 موتانت دیگر انتخاب شد. این موتانت mu24 بود. 4 - موتانت mu24 بار دیگر در معرض موتاژن قرار گرفت لیکن در این مرحله از ntg استفاده شد بطوری که غلظت نهایی ntg در سوسپانسیون باکتری 400?g/ml بود. در این مرحله 15 موتانت مناسب انتخاب گردیدند که از بین آنها mn97 بالاترین مقدار تولید را نشان می داد. تولید لیزین در این موتانت 2214mg/l بود. این موتانت نسبت به متیونین اگزوتروف و آستانه نیاز آن 30?g/ml بود. 5 - موتانت اخیر برای دومین بار در معرض ntg قرار گرفت . هدف از این مرحله جهش زایی جداسازی موتانتهای مقاوم به آمینواتیل سیستئین (aec) بود. در این قسمت از مطالع 18 موتانت در محیط حداقل حاوی 10g/c آمینواتیل سیستئین رشد کردند. مقدار لیزین تولید شده توسط این موتانتها مطالعه شد که موتانت 5017mg/ml mn97.8 لیزین بعنوان بهترین تولید کننده انتخاب گردید. موتانت mn97.8 همزمان با اگزوتروف بودن موتانت تنظیمی نیز بود. در تمام مراحل فوق برای مقایسه مقدار تولید لیزین در موتانتها و تعیین معنی داری بودن اختلاف بین آنها از آنالیزهای آماری (از جمله crd: طرح کاملا تصادفی) استفاده شد.
منابع مشابه
Production of S-Methylthioacetate by Brevibacterium linens.
Volatile sulfur compounds production by eight strains of Brevibacterium linens isolated from cheeses was demonstrated: methanethiol, dimethyldisulfide, and 2,3,4-trithiapentane. Four of these strains also produced S-methylthioacetate, an important aroma component of smear-coated cheeses. It is the first demonstrated microbiological production of a thioester.
متن کاملInfluence of Oxygen and pH on Methanethiol Production from l-Methionine by Brevibacterium linens CNRZ 918.
The effects of dissolved oxygen concentration and pH on the growth of Brevibacterium linens CNRZ 918 and its production of methanethiol from l-methionine were investigated. Optimal specific methanethiol production was obtained at 25% saturation of dissolved oxygen and at a pH between 8 and 9, whereas optimal cell growth occurred at 50% oxygen saturation and when the pH was maintained constantly...
متن کاملNa-Stimulated Transport of l-Methionine in Brevibacterium linens CNRZ 918.
The transport of l-methionine by the gram-positive species Brevibacterium linens CNRZ 918 is described. The one transport system (K(m) = 55 muM) found is constitutive for l-methionine, stereospecific, and pH and temperature dependent. Entry of l-methionine into cells is controlled by the internal methionine pool. Competition studies indicate that l-methionine and alpha-aminobutyric acid share a...
متن کاملTransport of aromatic amino acids by Brevibacterium linens.
Whole metabolizing Brevibacterium linens cells were used to study the transport of aromatic amino acids. Kinetic results followed the Michaelis-Menten equation with apparent Km values for phenylalanine, tyrosine, and tryptophan of 24, 3.5, and 1.8 microM. Transport of these amino acids was optimum at pH 7.5 and 25 degrees C for phenylalanine and pH 8.0 and 35 degrees C for tyrosine and tryptoph...
متن کاملComplete Genome Sequence of Brevibacterium linens SMQ-1335
Brevibacterium linens is one of the main bacteria found in the smear of surface-ripened cheeses. The genome of the industrial strain SMQ-1335 was sequenced using PacBio. It has 4,209,935 bp, a 62.6% G+C content, 3,848 open reading frames, and 61 structural RNAs. A new type I restriction-modification system was identified.
متن کاملEvidence for distinct L-methionine catabolic pathways in the yeast Geotrichum candidum and the bacterium Brevibacterium linens.
Tracing experiments were carried out to identify volatile and nonvolatile L-methionine degradation intermediates and end products in the yeast Geotrichum candidum and in the bacterium Brevibacterium linens, both of which are present in the surface flora of certain soft cheeses and contribute to the ripening reactions. Since the acid-sensitive bacterium B. linens is known to produce larger amoun...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید بهشتی - دانشکده علوم
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023